TUGAS PEMERIKSAAN FERRITIN DAN TIBC

TUGAS HEMATOLOGI III

(PEMERIKSAAN FERRITIN DAN TIBC)

DISUSUN OLEH :

NAMA                         : VIRA SAPUTRI

NIM                            : 18 3145 353 083

KELAS                        : 2018 C

PRODI DIV TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIS

FAKULTAS FARMASI, TEKNOLOGI RUMAH SAKIT DAN INFORMATIKA

UNIVERSITAS MEGAREZKY

2020/2021

A.    TES FERRITIN

·         Pra Analitik

a.       Persiapan Pasien

Apabila pasien mengkonsumsi obat oral Fe, maka pasien harus berhenti mengkonsumsi obat oral Fe 12 jam sebelum pemeriksaan.

b.      Persiapan Sampel

Menggunakan sampel serum atau plasma heparin

c.       Alat

1.      Centrifuge

2.      Well

3.      Mikropipet

4.      Fotometer

5.      Tabung

6.      Microtitre plate reader

d.      Bahan

1.      Sampel serum

2.      Buffer A, B dan C

3.      Larutan BSA 0,05%

4.      Larutan standart

5.      Larutan horseradish peroxidase

6.      Larutan substrat

7.      Asam sulfur 4M

8.      Larutan horseradish peroxidase

9.      Preparat antiferitin IgG

10.  Aquadest

11.  Tip biru

12.  Tip kuning

·         Analitik

a.       Metode

ELISA Double Sandwich

b.      Prinsip

Ikatan antara ferri (Fe³⁺) dan transferin dilepaskan oleh guarnidine dalam suasana pH 4,8. Asam askorbat akan mereduksi ion ferri (Fe³⁺) menjadi ferro (Fe²⁺). Fe²⁺ akan bereaksi dengan ferrozine membentuk komplek berwarna.

c.       Prosedur Kerja

1.      Disiapkan alat dan bahan

2.      Dilapisi microtitreplate, dengan cara :

-          Preparat antiferitin IgG diencerkan dengan 2 μg/ml buffer C, tambahkan 200 μl ke dalam tiap-tiap well/sumuran

-          Ditutup dan diinkubasi semalam pada suhu 4⁰C. kosongkan sumuran dengan cara dibalik dan di tapping pada handuk kering

-          Ditambahkan 200 μl 0,05% BSA dalam buffer C, diamkan 30 menit dalam suhu ruang

-          Cuci tiap sumuran dengan buffer A sampai 3X, plate dapat disimpan sampai 1 minggu pada tempat kering dan suhu 4⁰C

3.      Diencerkan 50 μl serum pasien dengan 1 ml buffer B

4.      Ditambahkan 200 μl larutan standart dan serum pasien ke dalam tiap sumuran dalam waktu 20 menit

5.      Ditutup dan diamkan selama 20 menit pada suhu kamar dan jauhkan dari sinar matahari

6.      Dikosongkan sumuran dan cuci 3X dengan buffer A

7.      Ditambahkan 200 μl preparat konjugasi antiferitin IgG dengan horseradish peroxidase yang sudah diencerkan, tutup dan diamkan selama 2 jam pada suhu kamar

8.      Dicuci 3X dengan buffer A

9.      Ditambahkan 200 μl larutan substrat pada tiap-tiap sumuran, inkubasi selama 30 menit

10.  Ditambahkan 50 μl asam sulfur 4M pada tiap-tiap sumuran untuk menghentikan reaksi

11.  Ditunggu 30 menit dan baca absorbannya pada 492 nm dengan microtitre plate reader atau ambil 200 μl larutan dari tiap sumuran dan masukkan dalam 800 μl aquadest, baca dengan fotometer

·         Pasca Analitik

Pria                  : 18-270 mg/L

Wanita              : 18-160 mg/L

Anak-anak       : 7-140 mg/L

Bayi usia 1-5 bulan : 50-200 mg/L

Bayi baru lahir : 25-200 mg/L

B.     TES TIBC (TOTAL IRON BINDING CAPACITY)

·         Pra Analitik :

a.       Persiapan pasien :

Tidak ada persiapan khusus

b.      Persiapan sampel :

Sampel serum Heparin

c.       Alat :

1.      Fotometer

2.      Rak tabung

3.      Tabung reaksi

4.      Mikropipet

5.      Centrifuge

6.      Sendok takar

d.      Bahan :

1.      Sampel serum heparin

2.      Reagen R1 dan R2

3.      Tip kuning dan biru

·         Analitik

a.       Metode :

Saturasi

b.      Prinsip :

TIBC dievaluasi setelah saturasi transferin oleh larutan besi dan kelebihan besi akan diabsorbsi oleh magnesium hydroxide carbonat. Setelah dicentrifuge konsentrasi besi dalam supernatant dikur

c.       Prosedur kerja :

1.      Disiapkan alat dan bahan

2.      Dipipet reagen R1 sebanyak 1 ml kedalam tabung reaksi dan tambahkn 0,5 ml sampel

3.      Di homogenkan

4.      Ditambahkan reagen R2 sebanyak 1 sendok takar kedalam tabung yang berisi sampel tadi

5.      Diinkubasi selama 20 menit

6.       Dihomogenkan

7.      Dicentrifuge selama 10 menit dengan kecepatan 3000 rpm

8.      Diambil supernatant

9.      Di baca hasil pada alat fotometer

·         Pasca Analitik

1.      Wanita                   : 2,1 – 3,4 mg/L

2.      Laki-laki                : 2,6 – 3,9 mg/L